La PCR a t

Apuntes

La PCR a tiempo real es una técnica molecular que permite amplificar y detectar ADN simultáneamente en un mismo vial cerrado, utilizando fluorescencia para cuantificar el ADN sintetizado en cada ciclo. Esto permite observar en tiempo real la cinética de la amplificación sin necesidad de manipulación posterior. Los termocicladores empleados incluyen un sistema de detección de fluorescencia que mide la intensidad emitida durante cada ciclo. Existen dos enfoques principales para esta detección: 1. Agentes intercalantes Se unen al ADN de doble hebra, aumentando la fluorescencia proporcional al ADN generado. Sus Ventajas son: Simplicidad, bajo coste. Y sus desventajas son Baja especificidad; pueden unirse a productos inespecíficos o dímeros de cebadores. Para mejorar la especificidad, se usan Cebadores optimizados. 2. Sondas de hibridación específicas: Usan pares de fluorocromos (un donador y un aceptor) que emiten fluorescencia mediante FRET (transferencia de energía por resonancia). Tipos: Sondas de hidrólisis: la polimerasa degrada la sonda, liberando el fluoróforo. Molecular beacons: sondas en forma de horquilla que se abren al hibridarse, separando donador y aceptor. Sondas FRET: d...