Cultivo celular, fraccionamiento y separación de organelos y proteínas

Apuntes

Los radioisótopos más usados son leucina-tritiada (3H-Leu) para trazar proteínas, timidina tritiada (3H-T) para trazar DNA y uridina-tritiada (3H-U) para trazar RNA. Una vez que se extrae la muestra se procede a realizar… • Fijación: También con glutaraldehído y tetróxido de osmio (OsO4). • Deshidratación: Con alcoholes etílicos de grado creciente. • Aclaramiento: Con óxido de propileno. • Impregnación (Inclusión): Con de resina epóxica o acrílica. • Corte: Con micrótomos de cuchilla de vidrio o diamante (ultramicrótomo). • Montura y Tinción: La muestra se coloca sobre rejilla metálica y se tiñe con citrato de plomo y el acetato de uranio. • Inmersión y Revelado: Terminada la tinción, la muestra se sumerge en una solución de sales de plata. Los sitios que contienen radioisótopos emiten partículas que hacen que precipite plata metálica de las sales, generando puntos densos negros visibles al TEM (o al MO de campo brillante si se preparó para este). CULTIVO CELULAR Las células pueden ser cultivadas en laboratorio para proveer a los científicos de gran cantidad de ellas y así estudiar las diversas actividades celulares. Las células se cultivan en medios artificiales llamados “sustrato...