CITOMETRÍA

Apuntes

• CITOMETRÍA DE FLUJO La citometría de flujo es un método rápido y sencillo para contar y diferenciar células y pequeñas partículas, basándose en su capacidad de emitir fluorescencia o de asociarse con moléculas capaces de emitirla (fluorocromos). • FUNDAMENTOS Y EVOLUCIÓN Desde su creación en 1969, la citometría de flujo ha evolucionado significativamente, con avances en los citómetros y en las técnicas de preparación de muestras, hasta llegar a los modelos actuales en 2006. • PREPARACIÓN DE MUESTRAS La preparación de muestras consta de tres pasos principales: 1. Extraer los núcleos en suspensión. 2. Teñir los núcleos. 3. Analizar los núcleos. • EXTRACCIÓN DE NÚCLEOS Para obtener núcleos en suspensión, existen varias técnicas: - Obtener protoplastos y lisarlos en medio hipotónico. - Destruir manualmente en tejido (chopping) con una cuchilla en un tampón de lisis. - Digestión enzimática de paredes celulares tras fijación en alcohol-ácido acético. - Aplastado u homogeneización en tampón de lisis de material fijado en formaldehido. • COMPONENTES DEL TAMPÓN DE EXTRACCIÓN El tampón debe proporcionar estabilidad a los núcleos aislados, reduciendo la a...