Biologia M

Apuntes

Biologia Molecular – 2ª frequência: Aula 7  Sequenciação do DNA Ao sequenciar um fragmento de DNA, é possível determinar a sequência de nucleotídeos, compreendendo como as bases azotadas (adenina, guanina, citosina e timina) estão dispostas na célula. A sequência nucleotídica é fundamental para o entendimento do gene. • Maxam-Gilbert: Método químico Este método de sequenciação inicia marcando radioativamente o DNA alvo. Por técnicas complexas, a cadeia inferior é eliminada, deixando apenas a superior com extremidade radioativa. Compostos capazes de clivar especificamente uma base azotada são adicionados e colocados em um gel de eletroforese. Assim, a separação dos fragmentos radioativos permite determinar a sequência desejada, que aparece no gel como fragmentos fluorescentes. • Sanger-Coulson: Terminadores de cadeia Outro método para determinar a sequência de bases azotadas de um fragmento de DNA utiliza primers, DNA polimerase e nucleotídeos modificados chamados ddNTPs, que não possuem grupo OH livre, atuando como terminadores de cadeia. Em quatro tubos de ensaio, cada um contendo um ddNTP diferente, a cadeia de DNA para de crescer ao encontrar o nucleotídeo corresponden...