EXTRACCI1N DE ADN

Apuntes

EXTRACCIÓN DE ADN ✅ Importancia Base de estudios de biología molecular Permite: PCR, diagnóstico molecular, OGM, análisis filogenético Para identificar mutaciones y patógenos 🔄 Tipos de Extracción Tradicional: lisis, separación con fenol-cloroformo o salting-out Kit comercial: más rápido, usa spin columns con sílice Elección del método depende de: tipo de muestra, técnica usada, infraestructura, tiempo y recursos ⚙️ Etapas Generales Lisis celular Separación de proteínas/lípidos Precipitación del ADN Purificación Elución del ADN 🧪 Calidad y Cantidad Glóbulos blancos: 30–60 ng/mL PCR requiere: 1 ng Evaluación: electroforesis en gel 🤖 Automatización MagNA Pure 96 / BioRobot → extrae hasta 96 muestras a la vez 🔬 PCR – Reacción en Cadena de la Polimerasa ✅ Definición Técnica enzimática que amplifica una región específica del ADN Alta sensibilidad y especificidad Creada por Kary Mullis (1980s) 🔄 Se basa en Replicación del ADN in vitro 🧪 Componentes del Master Mix PCR Agua ultrapura Buffer PCR (10X) → mantiene pH MgCl₂ → cofactor enzimático dNTPs → bases nitrogenadas Primers (forward/reverse) → delimitan secuencia Taq polimerasa → enzima termoestable ADN mol...