GUIA PR1CTICA N2 05 SEMANA 02 MEDIOS DE CULTIVO3 SIMPLES4 ENRIQUECIDOS5 SELECTIVOS Y DIFERENCIALES OBJETIVO Conocer los medios de cultivos para seleccionar el adecuado para el aislamiento de bacterias pat6genas LOGRO A MEDIR 7 Reconocer los diferentes medios de cultivo utilizados para el aislamiento de microrganismos. 8 Diferenciar los medios de cultivo seg9n su clasificaci10n. 11 Interpretar y evaluar correctamente los resultados obtenidos en los distintos medios de cultivo. a. MARCO TE12RICO Para el aislamiento de bacterias de un material patol13gico14 es necesario su cultivo en medios especiales con una determinada concentraci15n de iones de hidr16geno17 sales18 compuestos nitrogenados19 hidratos de carbono20 humedad y temperatura. Seg21n su utilizaci22n pueden ser23 simples24 enriquecidos25 selectivos y diferenciales. Tipos de medios de cultivo26 De acuerdo con su consistencia27 L28quidos29 Son los que se presentan en este estado30 denomin31ndose por esta raz32n caldos. El medio l33quido m34s utilizado es el llamado caldo nutritivo35 compuesto principalmente de extracto de carne36 peptona y agua. Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la obtenci37n de una suspensi38n bacteriana de una determinada concentraci39n. Semis40lidos41 Se preparan a partir de los medios l42quidos43 agregando a 44stos un agente solidificante en una proporci45n menor que para preparar medios s46lidos. Uno de sus usos es la investigaci47n de la movilidad de las bacterias. S48lidos49 Se preparan a partir de los medios l50quidos51 agreg52ndoles un agente gelificante53 el agar. Agar agar54 Es un pol55mero de az56cares obtenido de algas marinas. Se trata de una mol57cula insoluble en agua58 pero soluble en agua caliente59 una soluci60n al 161562 p63v forma un gel firme entre 32 y 3964C yno se funde por debajo de 8565C. Funde a 9066C y solidifica una vez fundido alrededor de los 4567C. Tiene el inconveniente de que introduce compuestos org68nicos indefinidos que pueden falsear los resultados de las necesidades nutritivas de un microorganismo. Especialmente 69tiles para el aislamiento de bacterias y observaci70n de colonias71 contienen de 2 a 3 72 de agar. Seg73n su utilizaci74n75 1. Medios Simples76 Son aquellos que poseen los componentes m77nimos para que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos especiales. El medio m78s conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar com79n80 que resulta de la adici81n de agar al caldo nutritivo. Otros representantes de este grupo se encuentra el agar el agar tripticasa de soja 82TSA8384 agar nutritivo. 2. Medios de enriquecimiento85 Son aquellos que86 adem87s de las sustancias nutritivas normales88 incorporan una serie de factores de crecimiento89 indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por adici90n de sangre u otros productos biol91gicos 92sangre93 suero94 leche95 huevo96 bilis97 etc.98 que aportan dichos factores. 3. Medios selectivos99 Son medios donde s100lo crece un grupo de bacterias inhibe al mismo tiempo a otros grupos101 contiene inhibidores102 indicadores de pH y az103cares que ayuda a identificarlo porel metabolismo que de este. Ejemplo104 agar Mac Conkey105 agar Salmonella106 Shigella 107SS108109 agar Manitol salado. 4. Medios diferenciales o metab110licos111 contiene sustancias nutritivas e indicadores de pH que permite detectar las reacciones bioqu112micas espec113ficas114 ayuda a realizar la identificaci115n de g116nero y especie. Ejemplo117 agar Triple az118car 119TSI120121 LIA122 agar Citrato de Simmons. b. MATERIAL DID123CTICO 124 Tubos con Caldo nutritivo 125 Placas con Agar nutritivo o Agar tripticasa soya 126TSA127 128 Caldo peptona 129 Caldo triptonado 130 Caldo RM-VP 131 Agar Mac Conkey 132 Agar Sangre 133 Agar chocolate 134 Agar Manitol salado 135 Agar SS 136 Agar TCBS 137 Agar TSI 138 Agar SIM 139 Agar Citrato de Simons 140 Agar LIA 141 Balanza Anal142tica 143 pH metro 144 Cabina de flujo laminar 145 Mechero Bunsen c. ACTIVIDADES Esquematice en un flujograma lo observado en la pr146ctica d. DESARROLLO DE LA PR147CTICA La pr148ctica se desarrolla de forma grupal y de acuerdo con la metodolog149a de la asignatura. Realizar un cuadro indicando150 a151 Los medios de cultivo que se vieron en la pr152ctica b153 El color que presentan cada medio de cultivo preparado. c154 Materiales que se usan para la preparaci155n. d156 Indicar cu157l es su indicador e inhibidor seg158n sea el caso. e. INSTRUMENTO DE EVALUACI159N 160 Aplicaci161n de r162brica 163 Cuestionario164 1. 165Cu166l es su clasificaci167n del agar chocolate seg168n su utilidad y que microorganismo se puede aislar en este medio169 2. Realice un cuadro de clasificaci170n de medio de cultivo de acuerdo con su consistencia y su utilidad171 incluyendo dos ejemplos de estos medios f. RESULTADOS ESPERADOS El alumno al final de la pr172ctica debe conocer los medios de cultivos para seleccionar el m173s adecuado para el aislamiento de bacterias pat174genas.GUIA PR175CTICA N176 06 SEMANA 02 SIEMBRA BACTERIANA. MEDIOS DE AISLAMIENTO OBJETIVO Conocer177 adquirir la destreza de colorear e interpretar los resultadoscomo 178parte de un diagn179stico. LOGRO A MEDIR 180 Realizar la siembra bacteriana de manera adecuada. 181 Reconocer las caracter182sticas morfol183gicas de las colonias. a. MARCO TE184RICO Cuando las bacterias se siembran en un medio de cultivo y en condiciones adecuadas185 ocurre un incremento marcado del n186mero de c187lulas. Algunas especies alcanzan una poblaci188n m189xima a las 24 horas y otras necesitan un per190odo m191s prolongado para alcanzar su m192ximo desarrollo. Los microorganismos que desarrollan en medios de cultivo en el laboratorio193 se denominan cultivos y el resultado de la multiplicaci194n bacteriana colonia195 as196 como el procedimiento por el cual se pone en contacto un microorganismo con un medio de cultivo197 se llama siembra. Existen varias t198cnicas de siembra199 siendo las m200s usadas201 La siembra por estr202a203 por dispersi204n agotamiento205 por inoculaci206n y por puntura. Las principales caracter207sticas morfol208gicas que presentan las colonias son209 210 Forma211 Circular212 el213ptica214 puntiforme y filamentosa. 215 Elevaci216n217 Plana218 convexa219 acuminada220 umbilicada. 221 Borde222 Entera223 ondulada224 dentada y filamentoso. 225 Superficie226 Lisa227 rugosa228 granulada. 229 Tama230o231 Di232metro en mil233metros. 234 Consistencia235 Cremosa236 membranosa y mucoide. 237 Cromog238nesis239 Pigmentaci240n verde241 amarilla242 roja243 etc. b. MATERIAL DID244CTICO 245 Tubos con suero fisiol246gico est247ril 248 Tubos de 16x150 con Caldo nutritivo 249 Tubos de 16x150 con Agar nutritivo 250 Placas con Agar nutritivo 251 Placas con agar TSA 252 Placas con Agar Mac Conkey 253 Placas con agar Salmonella-Shigella 254SS255 256 Placas con Agar hipert257nico de Chapman 258 Tubos con Agar Sabouraud 259 Tubos de 16x150 con medio Caldo nutritivo 260 Agar TSI261 LIA262 Citrato de Simmons 263 Asas de siembra en aro y punta 264 Placa con agar hipert265nico de Chapman o manitol salado con cepa de Staphylococcus. aureus 266 Placa con agar Mac Conkey con cepa de Escherichia coli 267 Placa con agar de Salmonella-Shigella 268SS269 con cepa de Salmonella typhimurium 270 Placa con agar SS con cepa de Klebsiella pneumoniae 271 Placa con agar SS con cepa de Proteus mirabilis 272 Cabina de flujo laminar 273 Papel lente 274 Gabinete de bioseguridad 275Cabina HorizontaCepas 276 Escherichia coli 277 Staphylococcus aureus 278 Salmonella typhimurium 279 Klebsiella pneumoniae 280 Proteus mirabilis c. ACTIVIDAD Esquematice en un flujograma lo observado en la pr281ctica. d. DESARROLLO DE LA PR282CTICA La pr283ctica se desarrolla de forma grupal y de acuerdo con la metodolog284a de la asignatura. A. Tipos de siembra285 Siembra por estr286a287 Diseminar en forma de zigzag288 una peque289a cantidad de muestra bacteriana sobre la superficie del medio de cultivo s290lido con la ayuda de un Asa de siembra en aro. Ejemplo agar nutritivo291 TSA292 LIA Siembra por dispersi293n-agotamiento294 Sembrar la muestra bacteriana en zig-zag295 hasta la mitad de la superficie del medio de cultivo s296lido que se encuentra en una placa Petri297 girar 298sta unos 45299 y continuar sembrando en zigzag300 hasta que se agote toda la muestra del Asade siembra en aro. Ejemplo Agar manitol-salado301 Agar SS Siembra por puntura302 Sembrar la muestra bacteriana en un tubo con Agar semi-s303lido304 con ayuda del Asa de siembra en punta305 introduci306ndola en forma vertical hasta la mitad de Agar. Ejm307 SIM Siembra por inoculaci308n309 Con ayuda de un Asa en aro310 tomar una muestra bacteriana e introducirlo hasta el fondo del tubo con medio l311quido312 procurando no tocar las paredes del tubo. Ejm313 caldo MR- VP314 peptona315 nutritivo.B. Lectura316 Con la ayuda del profesor317 1. El alumno proceder318 a hacer el estudio de lo que ha desarrollado en los medios de cultivos sembrados. 2. Realizar un protocolo con los resultados obtenidos e. INSTRUMENTO DE EVALUACI319N Aplicaci320n de r321brica. Desarrollo de preguntas cuestionario322 1. 323Cu324ndo deber325a utilizar los medios selectivos y no los enriquecidos326 2. 327Por qu328 debe realizar una siembra de estr329a y agotamiento330 3. Explique para qu331 sirven las pruebas bioqu332micas. 4. 333En qu334 medios de cultivo demuestra la motilidad bacteriana335 Explique f. RESULTADOS ESPERADOS Alumno interpreta los resultados de un antibiograma de manera correcta.GUIA PR336CTICA N337 07 SEMANA 02 PRUEBAS DE SENSIBILIDAD A LOS ANTIBI338TICOS 339ANTIBIOGRAMA340 OBJETIVO Conocer341 adquirir la destreza de colorear e interpretar los resultadoscomo parte de un diagn342stico. LOGRO A MEDIR 343 Realizar la t344cnica de difusi345n en Agar simple para determinarla susceptibilidad a los antibi346ticos. 347 Interpretar los resultados del m348todo utilizado. 349 Precisar las indicaciones y limitaciones de la t350cnica empleada

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