Transferència de gens i expressió: vectors i CRISPR

Apuntes

Microbiology: an introduction. 9 th ed. Pearson Benjamin Cummings. 2007) Selecció de cèl·lules recombinants Marcadors de selecció: Gens de resistència a antibiòtics → Selecció de cèl·lules amb plasmidi (pot estar buit) • Medi amb antibiòtic → només creixen cèl·lules resistents (amb vector incorporat) Segona selecció: Selecció de cèl·lules amb plasmidi recombinant (amb fragment d’ADN inserit) • PCR • Seqüenciació • Marcador de selecció addicional del plasmidi (ex: MCS en gen lacZ) ➢ lacZ codifica per la β-galactosidasa → Hidròlisi de lactosa (o X-Gal) ➢ No insert → Colònies blaves (hidròlisi d’X-Gal) ➢ Insert → Colònies blanques (no hidròlisi d’X- Gal) Exemple: • Ampicil·lina: Cèl·lules amb plasmidi • X-gal: Cèl·lules amb plasmidi recombinant (Madigan MT. et al. Brock Biology of Microorganisms. 16 th ed. Pearson Education. 2022) lacZ MCS Fragment d’ADN inserit Colònies blaves Colònies blanques pUC19 pUC19 Amp R Amp R lacZ lacZ Clonació Producció microbiana de proteïnes heteròlogues • Introducció • Clonació • Selecció d’hoste Hostes bacterians Per poder replicar l’ADN d’interès, el vector recombinant s’ha d’introduir en un organisme hoste adequat, on es pugui replicar Hostes bacteria...