T1CNICAS DE DIANG2STICO

Apuntes

TÉCNICAS DE DIANGÓSTICO MOLECULAR SOUTHERN BLOT Fue desarrollada por Edwin Southern. Detecta fragmentos de DNA, separados por tamaño mediante electroforesis en gel. Combina la separación electroforética del DNA con su transferencia a un soporte sólido o ‘‘filtro’’ (nailon o nitrocelulosa) para su hibridación. DNA extraído de muestras biológicas como sangre, esputo, tejido y células (linfocitos, amniocitos, etc.). Tiene 5 etapas: separación electroforética, desnaturalización, transferencia, hibridación y detección. Se utilizan enzimas de restricción, y los fragmentos de ADN resultantes se separan mediante corriente eléctrica para hacerlos desplazar a través de un gel, que permite que los fragmentos más pequeños se desplacen más rápido que los fragmentos más grandes. Los fragmentos de ADN se transfieren fuera del gel a una membrana sólida, que luego se expone a una sonda de ADN marcada con una sustancia radioactiva, fluorescente o química. La marcación permite que los fragmentos de ADN que contienen secuencias complementarias a la secuencia de ADN utilizada como sonda sean visualizados en el Southern blot NORTHERN BLOT Se usa para estudiar el ARN Por su menor tamaño, puede no se...